alp堿性磷酸酶染色服務(wù)技術(shù)介紹
堿性磷酸酶染色,又稱Alp染色，是用于檢測(cè)骨細(xì)胞、骨組織、腎、肝堿性磷酸酶的染色方法，使堿性磷酸酶呈黑色，細(xì)胞核呈淺藍(lán)色，這是成熟成骨細(xì)胞的標(biāo)志性酶;也可用于肝炎和腎炎的檢測(cè)。
堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)流程
(1)樣本接收：石蠟切片、細(xì)胞爬片、冰凍切片
(2)實(shí)驗(yàn)步驟：脫蠟至水—染液配制-Alp染色-蘇木素淺染核
(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：染色好的玻片
alp堿性磷酸酶染色服務(wù)注意事項(xiàng)
1、注意染液要現(xiàn)配現(xiàn)用。
2、注意切片要用超純水水洗。
TRAP染色是用于檢測(cè)骨組織、骨細(xì)胞中特征物質(zhì)的染色,使破骨細(xì)胞呈紅色,背景呈綠色或藍(lán)色。抗酒石酸酸性磷酸酶(Trap)為破骨細(xì)胞的標(biāo)志酶,特異地分布于破骨細(xì)胞中,為破骨細(xì)胞所*,通常作為鑒別破骨細(xì)胞的重要標(biāo)志物。
TRAP染色服務(wù)內(nèi)容
1、石蠟切片4~5um，脫蠟至水洗；細(xì)胞爬片或者冰凍切片用80%酒精固定后蒸餾水水洗3次，每次3分鐘。
2、配制六偶氮副品紅溶液
3、配制孵育液：取1ml六偶氨副品紅加到18ml醋酸鹽溶中，再加入1ml紫酚ASBI磷酸鹽溶液，再加酒石酸鉀鈉 282mg。調(diào)pH值5.0，過濾備用；
4、陰性對(duì)照孵育液：取1ml六偶氨副品紅加到18ml醋酸鹽溶中，再加酒石酸鉀鈉282mg。調(diào)pH值5.0，過濾備用
5、切片入37℃蒸餾水水洗30秒；
6、入孵育液37℃孵育50-60分鐘；
7、去離子水水洗3分鐘；8、入蘇木素復(fù)染40秒；
9、自來水水洗10分鐘返藍(lán)；
10、甘油明膠封片
alp堿性磷酸酶染色服務(wù)原理
人血液和造血細(xì)胞的堿性磷酸酶pH值為9.4，主要見于中性粒細(xì)胞系的成熟階段或晚幼粒細(xì)胞。在不同生理狀態(tài)和病理狀態(tài)中均有明顯的改變，具有鑒別診斷意義。
方法
目前堿性磷酸酶染色法有改良Gomori法及偶氮偶聯(lián)法 (Kaplow)。
改良Gomori法原理為： 細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶水解試劑中的甘油磷酸鈉釋放出無機(jī)磷酸鹽，與鈣離子作用生成磷酸鈣，再與鈷離子作用生成磷酸鈷，后與硫化銨生成黑色硫化鈷顆粒，沉淀于細(xì)胞漿中。
偶氮偶聯(lián)法原理為：細(xì)胞中堿性磷酸酶在pH 9.5～9.8的緩沖液中，催化α-磷酸萘酚偶聯(lián)成不溶性有色偶氮染料沉淀于細(xì)胞漿中。
結(jié)果解讀
ALP活性僅見于成熟或接近成熟的中性粒細(xì)胞。計(jì)數(shù)100個(gè)中性粒細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)，稱陽性率。還可按陽性細(xì)胞中的顆粒密度分為1～5級(jí)，指數(shù)各為1～5。計(jì)算100個(gè)中性粒細(xì)胞，將每個(gè)細(xì)胞的指數(shù)相加，其總和稱陽性指數(shù)或積分，作為判斷酶活性的半定量的指標(biāo)。由于方法及條件的不同，正常差別很大，故每次檢查時(shí)應(yīng)作正常對(duì)照。本法的正常值陽性率為60～99%，陽性指數(shù)169～367，平均為274。
